{"created":"2021-03-01T06:19:24.509295+00:00","id":2792,"links":{},"metadata":{"_buckets":{"deposit":"b87d6a5c-23cb-45c4-8c3d-9af9a2f9b167"},"_deposit":{"id":"2792","owners":[],"pid":{"revision_id":0,"type":"depid","value":"2792"},"status":"published"},"_oai":{"id":"oai:repository.dl.itc.u-tokyo.ac.jp:00002792","sets":["27:297:303","9:233:280"]},"item_7_alternative_title_1":{"attribute_name":"その他のタイトル","attribute_value_mlt":[{"subitem_alternative_title":"パルスフィールドゲル電気泳動を用いた牛由来腸管出血性大腸菌0157:H7に関する分子疫学的研究"}]},"item_7_biblio_info_7":{"attribute_name":"書誌情報","attribute_value_mlt":[{"bibliographicIssueDates":{"bibliographicIssueDate":"2000-12-25","bibliographicIssueDateType":"Issued"},"bibliographic_titles":[{}]}]},"item_7_date_granted_25":{"attribute_name":"学位授与年月日","attribute_value_mlt":[{"subitem_dategranted":"2000-12-25"}]},"item_7_degree_grantor_23":{"attribute_name":"学位授与機関","attribute_value_mlt":[{"subitem_degreegrantor":[{"subitem_degreegrantor_name":"University of Tokyo 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実験感染牛における0157の排菌パターンと分離菌の遺伝子型の変化　自然感染牛で認められたClonal turnover(Karch et al.1995)が実験的に再現できるか否か検討を加えた。事前に腸管出血性大腸菌陰性であることを確認した8週齢のホルスタイン去勢雄牛3頭を個別飼育し,うち2頭(No.1,2)に109CFUの0157(stx1-,stx2+,eaeA+)を経口投与し,他の1頭(No.3)は未投与対照とした。投与の翌日より計3頭の牛から毎日直腸便を採取し,0157を分離し,それをPFGEで解析した。図1に示したように2頭の実験感染牛において,0157の排菌は投与後49日,50日後まで観察された。未投与対照牛からは0157は分離されなかった。自然感染牛における成績と合わせて考えると,0157は牛に対して病原菌としてよりも,大部分の非病原性大腸菌と同様の挙動を示し,その排菌は再感染がなければ2ヶ月前後で終了することが示唆された。分離菌401株の解析において,投与後2日目には両牛から変異菌が回収された(図1)。牛No.1では投与後32日目以降投与菌が回収不能となった。牛No.2では投与後38,42日目に投与菌は回収されなかったが,その後投与菌のみが回収された。各牛由来の変異菌に17種類および10種類のPFGE型が認められたが,両牛間で同じPFGE型を示す株は認められなかった。以上の成績から牛腸管内における0157のランダムな変異と,適応クローンの増殖による優勢菌の交代を反映する現象としてのClonal turnoverが2頭の実験感染牛で再現できたものと考えられた。牛No.1から分離された株に90kbプラスミドの脱落を伴う変異菌が認められた(図1)。プラスミド脱落による変化を差し引くと,変異菌と投与菌のPFGE像の比較において,染色体DNAに由来する範囲で異なるバンド数は最大4本であった。このことから,PFGEを用いて牛由来0157の解析を行う場合,少なくとも異なるバンド数が4本までは疫学的関連を疑う必要があることが示唆された。／4.　日本および米国の牛から分離された0157の疫学マーカーによる比較　グローバルな視点からの疫学的知見を得ることを目的として,わが国と米国における牛由来0157の比較を行った。国内の牛から分離された91株と米国内で牛から分離された415株をPFGE,PCR,あるいはファージタイピング等の手法によって比較したところ,日本の牛から分離された3株(JP37,JP88,JP102)は米国の牛から分離された株と高い相同性を示した。すなわちJP37株は1米国株とB1nIを用いたPFGEで識別不能であり,XbaI,SpeIを用いたPFGEでは異なるバンド数が4本以下であった。またJP88株は1米国株と同じファージ型に属しており,上記3種の制限酵素を用いたPFGEで異なるバンド数は3本以下であった。さらにJP102株は1米国株と同じファージ型に属しており,上記3種の制限酵素を用いたPFGEで異なるバンド数は5本以下であった。以上の成績から本菌は共通の媒体を介して長い距離を伝播し,複数の大陸の牛群に広がる汎流行型感染を引き起こす可能性が考えられた。／おわりに　以上の研究より,わが国の牛由来0157型別法としてはPFGEが最も優れており,疫学解析上の有力なツールとして使用可能であることが明らかとなった。牛由来77株中1株は2種類の制限酵素を用いたPFGE,毒素遺伝子型別,ファージ型別のいずれの手法を用いてもヒトの集団感染株と識別不能であったこと,さらに牛の保菌期間が少なくとも50日以上であったことから,わが国においても牛がヒトヘの感染源となっている可能性が示唆された。また本研究において牛の腸管内において0157の遺伝的変異と優勢クローンの交代現象,すなわちclonal 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